發(fā)表者:北京博奧森生物 發(fā)表時間:2016-2-15
流式細(xì)胞檢測標(biāo)本樣品的制備方法(供參考)
1 目標(biāo)細(xì)胞原本就處于單細(xì)胞狀態(tài),如單細(xì)胞懸液制備就比較簡單。
2 目標(biāo)細(xì)胞來源于外周血(PBMC,外周血單核細(xì)胞),用FICOLL密度梯度離心,單個核細(xì)胞再用PBS洗滌重懸即可。
3 目標(biāo)細(xì)胞來源于胸水、腹水、腦脊液等,只要將各種體液離心沉淀,PBS洗滌幾次,用濾網(wǎng)過濾即可。
4 目標(biāo)細(xì)胞是體外培養(yǎng)的細(xì)胞,若為懸浮細(xì)胞,直接收集即可。
5 目標(biāo)細(xì)胞若是貼壁細(xì)胞,用胰酶消化后收集即可。
6 目標(biāo)細(xì)胞是免疫器官內(nèi)的細(xì)胞:如骨髓、胸腺、脾、淋巴結(jié)等,由于這些組織器官主要有免疫細(xì)胞組成,細(xì)胞與細(xì)胞之間的緊密接觸很少,而且其中含有的纖維結(jié)締組織較少,所以可以直接采用機械研磨法得到單細(xì)胞懸液。
7 骨髓比較特殊,其組織疏松,使用研磨法磨碎,然后用濾網(wǎng)過濾一次就可以得到單細(xì)胞懸液。注意:研磨棒與組織接觸的部位不要太硬,最好是有一定彈性的橡膠(如注射器的內(nèi)芯),同時研磨時不要太用力,否則得到的單細(xì)胞懸液含有很多死細(xì)胞和細(xì)胞碎片,影響實驗結(jié)果。
8 目標(biāo)細(xì)胞來自實體器官,如肺、肝臟等,可用酶消化法得到單細(xì)胞懸液。將實體臟器用剪刀剪成細(xì)小碎片,加入用于消化的IV型膠原酶,置于37℃孵箱中消化,消化的時間根據(jù)臟器的不同而定,然后用研磨棒磨碎過濾即可得到單細(xì)胞懸液。
9 腫瘤組織也可采用上述方法。