免疫印跡技術(shù) (Western blotting, WB) 是蛋白定性和定量的金標(biāo)準(zhǔn)，因此廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究。由于Western blot檢測包含多個步驟，樣品制備、上樣或轉(zhuǎn)膜等實驗過程中任何細(xì)微的差異，都可能導(dǎo)致實驗結(jié)論的不一致性，甚至完全相悖。為了避免實驗操作差異引起誤差，在任何WB檢測實驗中，都需要設(shè)定合適的內(nèi)參。
WB最常見的應(yīng)用是研究生物樣品中蛋白質(zhì)豐度的變化。內(nèi)參的信號通常用來對目的蛋白的信號進行標(biāo)準(zhǔn)化，需要強調(diào)的是內(nèi)參抗體應(yīng)該與實驗抗體在相同的印跡上進行。因此選擇的內(nèi)參蛋白必須是實驗樣本中穩(wěn)定表達的蛋白，一般會選擇組成型表達且是細(xì)胞基本功能必需的管家蛋白如細(xì)胞骨架蛋白作為內(nèi)參。但是進一步的研究表明，管家蛋白的表達并不恒定，會因?qū)嶒灄l件的改變而改變。
選擇內(nèi)參應(yīng)遵循以下原則
穩(wěn)定表達：在特定實驗條件下（如特殊的實驗處理或不同的發(fā)育階段），內(nèi)參蛋白的水平相對于總蛋白保持恒定；
分子量大小：內(nèi)參蛋白分子量與目的蛋白分子量明顯不同，最好能相差 5kd 以上；
表達水平：內(nèi)參蛋白應(yīng)在實驗樣本中高表達；
豐度相似性：實驗樣本中內(nèi)參蛋白的表達豐度應(yīng)與目的蛋白的豐度有相似性，實驗方案和檢測方法可以揭示內(nèi)參蛋白和目標(biāo)蛋白水平的變化，而不會出現(xiàn)信號飽和；（如果內(nèi)參蛋白的表達水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于目的蛋白，必須對內(nèi)參蛋白進行梯度稀釋以確定內(nèi)參蛋白的檢測范圍）。
