文章信息
文章名稱(chēng)：Neddylation of Coro1a determines the fate of multivesicular bodies and biogenesis of extracellular vesicles.
發(fā)表期刊：J Extracell Vesicles. 2021 Oct;10(12):e12153.
影響因子 (IF) ：25.841本文應(yīng)用 Bioss 產(chǎn)品：
Rabbit anti-Rab7 Cat: bs-6703R
文中檢測(cè)種屬: Human；應(yīng)用: Cryo-EM
圖片來(lái)自原文FIGURE 6. (e)
Rabbit anti-UBE2F Cat: bs-8378R
文中檢測(cè)種屬: Human，Mouse；應(yīng)用: WB
圖片來(lái)自原文FIGURE 4.(a)
研究背景
胞外囊泡 (EVs) 根據(jù)其大小和來(lái)源主要分為兩類(lèi)：微囊泡和外泌體。微囊泡是從質(zhì)膜向外出芽脫落，形成直徑在 50nm ~ 1μm 之間的微囊泡、微粒和大囊泡。外泌體是由內(nèi)體途徑產(chǎn)生的直徑在 30nm ~ 150nm的小的囊泡，作為細(xì)胞之間獨(dú)特的傳遞載體，參與多種疾病的過(guò)程，包括發(fā)育，免疫，組織穩(wěn)態(tài)，腫瘤和神經(jīng)退行性疾病等。因此，深入探究以外泌體為代表的胞外囊泡的生物發(fā)生的調(diào)控機(jī)制是治療這些疾病的潛在策略，同時(shí)也對(duì)于其作為診斷標(biāo)記物和治療性藥物載體有著重要的臨床意義。在 EV 的亞群外泌體的生物合成過(guò)程中，多囊泡體 (MVBs) 或者與溶酶體融合而降解，或者與質(zhì)膜融合釋放管腔內(nèi)囊泡形成外泌體，MVBs 的命運(yùn)直接決定了外泌體的生物發(fā)生。然而，MVBs 如何靶向至溶酶體以及質(zhì)膜融合的機(jī)制仍有待深入研究。蛋白質(zhì)的翻譯后修飾在 EV 的生物發(fā)生中起重要的調(diào)節(jié)作用。Neddylation 作為類(lèi)泛素化修飾的一種，尚無(wú)明確的研究證實(shí)其是否可以參與調(diào)節(jié) EV 的生物發(fā)生。
研究原理
為探究Neddylation是否參與調(diào)節(jié) EV 的生物發(fā)生，首先我們使用Neddylation 特異性抑制劑 MLN4924 探究 Neddylation 對(duì)EV 分泌的影響。接著，我們從調(diào)節(jié) EV 生成的三個(gè)方面：MVBs 的早期形成、MVBs 靶向溶酶體降解、MVBs 與質(zhì)膜的融合分別探究 Neddylation 在調(diào)控 EV 分泌中的作用，最終證實(shí) Neddylation 通過(guò)靶向 MVBs 至溶酶體降解來(lái)抑制 EV 的生成。我們進(jìn)而通過(guò)質(zhì)譜分析找到在調(diào)控 EV 分泌過(guò)程中 Neddylation 修飾的底物蛋白 Coro1a，并證實(shí)了 Coro1a 在生理?xiàng)l件下可以發(fā)生 Neddylation 修飾，以及Coro1a 是 Neddylation 調(diào)控 EV 分泌過(guò)程所依賴的。隨后我們明確了 Coro1a 發(fā)生 Neddylation 修飾的機(jī)制和主要修飾位點(diǎn)。之后，我們進(jìn)一步探討 Neddylation 修飾的 Coro1a 在 EV 生成中的作用以及其是否可以用作調(diào)節(jié) EV 分泌的靶標(biāo)，從而提示我們通過(guò) Coro1a 介導(dǎo)的EV分泌調(diào)節(jié)來(lái)調(diào)控腫瘤的發(fā)展。
研究結(jié)果
我們首先發(fā)現(xiàn) Neddylation 通過(guò)促進(jìn) MVBs 的靶向溶酶體降解從而抑制 EV 的分泌。進(jìn)而，我們鑒定出 Neddylation 的新底物 Coro1a，以及與 Coro1a 的 Neddylation 修飾過(guò)程中相關(guān)的 E2 結(jié)合酶 UBE2F 和 E3 連接酶 TRIM4。在 TRIM4 的催化下，NEDD8 主要與 Coro1a 的第 233 位賴氨酸殘基結(jié)合形成共價(jià)鍵。而后， Neddylation 修飾的 Coro1a (NEDD8-Coro1a) 與 Rab7 直接相互作用并將 Rab7 招募至 MVBs，從而促進(jìn) MVBs 的溶酶體降解，進(jìn)而導(dǎo)致 MVBs 與質(zhì)膜的融合減少和 EV 分泌降低。此外，通過(guò)體內(nèi)腫瘤模型，我們證實(shí) Coro1a 是通過(guò)減少 EV 分泌來(lái)抑制腫瘤進(jìn)展的有效靶標(biāo)。
研究結(jié)論
我們的研究證實(shí)，Neddylation 在 EV 的生物發(fā)生中起著負(fù)調(diào)作用。同時(shí)，我們鑒定出 Neddylation 的新底物 Coro1a，明確了 Neddylation 修飾 Coro1a 招募 Rab7 促使 MVBs 靶向溶酶體融合從而調(diào)控EV的生成，從而揭示了調(diào)節(jié) EV 生物發(fā)生的新機(jī)制，為調(diào)控 EV 生成和腫瘤治療提供新的靶點(diǎn)。
文章內(nèi)使用的抗體—Bioss相關(guān)推薦
二抗|
英文名稱(chēng) |
裸抗貨號(hào) |
文獻(xiàn)數(shù)量 |
標(biāo)記二抗 |
|
Goat Anti-Rabbit IgG H&L |
90 |
||
|
Goat Anti-Mouse IgG H&L |
44 |
||
|
Donkey Anti-Rabbit IgG H&L |
3 |
|
產(chǎn)品名稱(chēng) |
貨號(hào) |
交叉反應(yīng) |
應(yīng)用 |
PubMed |
|
Rabbit anti-Rab7 (Cryo-EM) |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
5 |
|
|
Rabbit anti-UBE2F |
- |
- |
- |
|
|
beta-Actin (Loading Control) |
Mo Hu Rt |
WB, IHC, FC, ICC |
769 |
|
|
beta-Actin (Loading Control) |
Hu |
WB |
55 |
|
|
Ki-67 |
Hu |
FC |
- |
|
|
Ki-67 |
Mo Hu |
IHC, FC, IF, ICC |
62 |
|
|
Ki-67 |
Hu |
IHC, FC, IF, ICC |
- |
|
|
Ki-67 |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
3 |
|
|
Ki-67 |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
15 |
|
|
Ki-67 |
Mo Hu |
IHC, FC, IF, ICC |
2 |
|
|
Ki-67 |
Hu |
IHC, FC, IF, ICC |
3 |
|
|
Ki-67 |
Hu Rt |
IHC, IF, ICC |
5 |
|
|
Ki-67 |
Hu |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
CD8 |
Mo Hu |
WB, IHC, IF, ICC |
50 |
|
|
CD8 |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
2 |
|
|
CD8 |
Hu |
WB |
- |
|
|
CD8 |
Rt |
WB |
- |
|
|
CD8 |
Mo |
WB |
- |
|
|
CD8 |
Mo |
WB |
- |
|
|
CD8 |
Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
3 |
|
|
CD8 alpha |
Rt |
WB |
4 |
|
|
C-Myc |
Hu |
WB |
- |
|
|
C-Myc |
Hu |
IHC, IF, ICC |
17 |
|
|
c-MYC |
Hu |
WB |
- |
|
|
Myc tag |
Hu |
WB, IHC, IF, ICC |
1 |
|
|
Myc tag |
Fusion Protein |
WB |
- |
|
|
Myc tag |
Recombinant protein |
WB |
- |
|
|
n-Myc |
Mo |
WB |
- |
|
|
n-Myc |
Hu |
IHC, IF, ICC |
3 |
|
|
CD45 |
Hu Rabbit |
FC |
14 |
|
|
CD45 |
Mo Rt |
FC |
- |
|
|
CD45 |
Rt |
FC |
- |
|
|
CD45 |
Hu Rt |
WB, FC |
6 |
|
|
CD45 |
Hu |
FC |
1 |
|
|
CD45 |
Hu |
FC |
- |
|
|
CD45 |
Hu |
FC |
- |
|
|
CD45 |
Hu |
WB |
- |
|
|
His tag |
Recombinant protein |
WB |
14 |
|
|
His Tag |
Recombinant protein |
WB |
- |
|
|
His tag |
Recombinant protein |
WB |
- |
|
|
LAMP1 |
Hu Rt |
IHC, FC, IF, ICC |
11 |
|
|
CD9 |
Mo |
WB |
- |
|
|
CD9 |
Mo |
IHC, IF, ICC |
1 |
|
|
CD9 |
Mo Hu Rt |
WB, FC |
9 |
|
|
CD9 |
Mo Hu |
WB, IHC, IF, ICC |
- |
|
|
CD63 |
Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
8 |
|
|
CD63 |
Mo |
IHC, IF, ICC |
1 |
|
|
TSG101 |
Hu Rt |
WB, IHC, IF, ICC |
6 |
|
|
TSG101 |
Hu |
WB |
- |
|
|
TSG101 |
Mo Hu Rt |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
CD81 |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
6 |
|
|
CD16 |
Mo Hu Rt |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
5 |
|
|
CD16 |
Mo |
WB |
- |
|
|
CD32 |
Hu |
WB, FC |
- |
|
|
CD32 |
Hu |
WB |
1 |
|
|
PD-1 |
Mo Hu Rt |
WB, FC |
5 |
|
|
Granzyme A |
Mo |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Granzyme B |
Hu |
IHC, FC, IF, ICC |
3 |
|
|
Granzyme K |
Mo |
WB |
- |
|
|
Annexin A1 |
Hu Rt |
WB, IHC, IF, ICC |
2 |
|
|
TIM 3 |
Mo Rt |
WB, IHC, IF, ICC |
2 |
|
|
Ubiquitin |
Mo Hu Rt |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
1 |
|
|
Ubiquitin |
Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
1 |
|
|
Ubiquitin |
Mo |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Ubiquitin |
Mo Hu Rt |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Ubiquitin |
Mo |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Cullin 1 |
Hu |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Cullin 3 |
Hu |
WB |
1 |
|
|
CORO2B |
Mo Hu |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
CORO6 |
Mo |
WB |
- |
|
|
CORO7 |
Hu |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
Coronin 3 |
Mo |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
ALIX |
Mo Hu Rt |
WB, IHC, IF, ICC |
1 |
|
|
Flag Tag |
Recombinant protein |
WB |
1 |
|
|
Flag Tag |
Recombinant protein |
WB |
- |
|
|
HA tag |
Recombinant protein |
WB |
- |
|
|
EEA1 |
Hu |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
HGS |
Rt |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
GM130 |
Rt |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
MON1A |
Hu |
WB |
- |
|
|
MON1B/HSRG1 |
Mo |
IHC, IF, ICC |
- |
|
|
RAB7 |
Mo Hu |
WB, IHC, FC, IF, ICC |
- |
產(chǎn)品信息以官網(wǎng)為準(zhǔn)
