發(fā)表者:北京博奧森生物 發(fā)表時間:2016-2-15
熒光素直接標(biāo)記的一抗(直接免疫熒光法)
試劑準(zhǔn)備:
1.準(zhǔn)備熒光標(biāo)記的一抗和同型對照抗體
2.細胞洗液:含有2%BSA(牛血清白蛋白)、0.1%疊氮鈉的PBS.
3.固定液:1%多聚甲醛PBS液(pH7.2)pH值一定要準(zhǔn)確,否則會影響檢測結(jié)果。
操作方法:
1.每個樣品取2支流式檢測管,分別注明同型對照和待測,兩管分別加入106-7/100μl個待側(cè)細胞(若細胞濃度低或加入的細胞懸液較多,可1200轉(zhuǎn)/每分鐘,10分鐘低溫離心,棄上清,保證100μl被檢樣品)。
2.同型對照管中加入熒光標(biāo)記同型對照抗體,做陰性對照;待測管中加入熒光標(biāo)記的一抗,作為實驗管,各加30μl (按抗體使用說明書,一抗可做選擇幾個梯度1:20、50、100倍稀釋)混勻即可。
3. 4℃度孵育30分鐘,加入細胞洗液,1200轉(zhuǎn)/每分鐘,10分鐘低溫離心,反復(fù)2次。
4.去除上清,控干,加入固定液0.5ml,混勻。
5.上機檢測,先做同型對照,調(diào)整電壓至陰性區(qū)范圍,再測實驗管即可。