發(fā)表者:北京博奧森生物 發(fā)表時間:2016-2-15
使用基因工程的方法來表達蛋白質(zhì),必須經(jīng)過純化才能實現(xiàn)最終目的。不同性質(zhì)的蛋白質(zhì)純化條件有所不同,亦很難摸索。所以將目的蛋白和一個親和純化的標(biāo)簽蛋白進行融合表達-通過親和純化Tag蛋白來純化目的蛋白,就成為常用的間接手段。
而His-Tag這個只有6個組氨酸大小的標(biāo)簽蛋白在pH值8.0時不帶電,幾乎沒有免疫原性。經(jīng)過對很多種蛋白的融合驗證試驗,無論對蛋白的分泌、折疊結(jié)構(gòu)、甚至功能都沒有影響,即可放在N端也可放在C端,而更重要的是使用6HIS抗體裝配的親和層析純化柱,通過免疫親和層析純化的方法-將帶有6個組氨酸標(biāo)簽的目標(biāo)蛋白純化出來,不但目標(biāo)蛋白純度高,而且簡單、易行,成本低。所以對融合蛋白純化很方便、實用。因此,已得到國內(nèi)外人員的廣泛應(yīng)用。
His-Tag的特點:
1) 6xHis與不同的Sepharose純化填料結(jié)合(捆綁),可不受構(gòu)象的影響,在天然或變形的條件下可進行進一步純化。
2) 可在溫和的洗脫液環(huán)境中,其結(jié)合、洗滌及洗脫步驟不會對蛋白結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響。
3) 6xHis標(biāo)簽比普通(Tag)要小得多,經(jīng)純化后的蛋白可直接進行下游操作??捎糜谌魏伪磉_系統(tǒng)(包括:細菌,桿狀病毒和哺乳動物)
4) 6xHis標(biāo)簽在生理溶液pH下不帶電荷,其標(biāo)簽不會干涉重組蛋白的結(jié)構(gòu)和功能, 6xHis不會影響蛋白分泌
5) 6xHis標(biāo)簽免疫原性差,重組蛋白可以不必除去標(biāo)簽而直接作為抗原進行免疫
博奧森生物技術(shù)公司已成功開發(fā)His-Tag-6個組氨酸抗體。