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β-Actin貨號(hào):bs-0061R最為完美的Western Blot內(nèi)參表達(dá)抗體
發(fā)表者:北京博奧森生物      發(fā)表時(shí)間:2016-2-15
眾所周知,要用Western Blot比較不同條件下或者不同組織中,目的蛋白表達(dá)量的相對(duì)多少,前提條件是等量的蛋白上樣,才有比較的基礎(chǔ)。特別是在表達(dá)量不高時(shí),上樣量的差別就很可能影響結(jié)果的分析。所以需要內(nèi)參做對(duì)比。 內(nèi)參即是內(nèi)部參照(Internal Control),對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)來(lái)說(shuō)一般是指由管家基因編碼表達(dá)的蛋白(Housekeeping Proteins),它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定,在檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平變化時(shí)常用它來(lái)做參照物。在Western Blotting 實(shí)驗(yàn)中,除了需要進(jìn)行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上樣電泳、轉(zhuǎn)膜、靶蛋白抗體孵育、顯色等步驟以外,還需要進(jìn)行內(nèi)參的檢測(cè),以校正蛋白質(zhì)定量、上樣過(guò)程中存在的實(shí)驗(yàn)誤差,以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 有我北京博奧森生物技術(shù)公司自主研發(fā)的β-Actin肌動(dòng)蛋白(抗體)貨號(hào):bs-0061R。 特點(diǎn)優(yōu)勢(shì) 1.經(jīng)親和層析純化的濃縮液(或凍干粉),該抗體質(zhì)量超過(guò)國(guó)外任何公司的同種產(chǎn)品; 2.用于Western Blotting為非常清晰的一條帶稀釋比達(dá)1:400; 3.用于免疫組化表達(dá)位置準(zhǔn)確,特異性強(qiáng)、效價(jià)高; 4.分子量:42Kda,根據(jù)需要可提供各種不同的包裝; 5.IgG含量為100μg/0.2ml 500ug/1ml; 6.價(jià)格僅為0.1ml/400.00元:0.2ml/650.00元人民幣; 7.只需4℃保存運(yùn)輸,有效期:-20℃液體長(zhǎng)達(dá)兩年(凍干粉狀態(tài)長(zhǎng)達(dá)5年以上); 8.產(chǎn)品費(fèi)用低 ,性能穩(wěn)定、質(zhì)量可靠、易于保存; 9.該抗體適用廣泛,可用于人、羊、狗、豬、牛、兔、雞和大、小鼠等動(dòng)物種屬蛋白檢測(cè); 在國(guó)外發(fā)表的文章中,Western Blotting 實(shí)驗(yàn)結(jié)果須進(jìn)行內(nèi)參校正已成為一種慣例。但是,國(guó)內(nèi)仍有不少科研人員在Western Blotting實(shí)驗(yàn)中忽略了內(nèi)參的使用,將蛋白濃度測(cè)定作為規(guī)范需相互比較的各種樣品間上樣量等同的唯一方法。然而各種蛋白質(zhì)濃度定量方法,都存在局限性,不能完全準(zhǔn)確的確定各種樣品的準(zhǔn)確蛋白濃度。 蛋白質(zhì)定量以后進(jìn)行電泳時(shí)需要等量上樣,此步驟也存在操作誤差。在Western blotting實(shí)驗(yàn)時(shí)使用內(nèi)參,即可簡(jiǎn)便地對(duì)定量和上樣步驟產(chǎn)生的誤差進(jìn)行校正。此外使用內(nèi)參可以作為空白對(duì)照,檢測(cè)蛋白轉(zhuǎn)膜情況是否完全、整個(gè)Western Blot顯色或者發(fā)光體系是否正常。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析其實(shí)很簡(jiǎn)單:如果樣品蛋白量有限,只夠進(jìn)行一次電泳轉(zhuǎn)膜實(shí)驗(yàn)時(shí),分別檢測(cè)樣品的內(nèi)參量和目的蛋白量。將各樣品目的蛋白量分別除以其內(nèi)參含量,得到的數(shù)值即為內(nèi)參校正后的各樣品中目的蛋白相對(duì)含量,再用此數(shù)值進(jìn)行樣品間的比較和分析,得到目的蛋白含量在不同樣品間的實(shí)際變化結(jié)果。如果樣品量充分,可以先檢測(cè)內(nèi)參,觀測(cè)樣品間內(nèi)參顯色條帶是否一致,根據(jù)差異大小調(diào)整各樣品的上樣量重新進(jìn)行Western Blotting實(shí)驗(yàn),至內(nèi)參量一致為止;若內(nèi)參一致,即可進(jìn)行不同樣品間目的蛋白表達(dá)變化分析。這樣雖然麻煩一點(diǎn),但是可以保證結(jié)果更有說(shuō)服力,更可信。畢竟我們的實(shí)驗(yàn)是一種嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鳌?
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