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重組乙肝病毒核心抗原(rHBcAg)、 重組乙肝病毒e抗原(rHBeAg)制備完成
發(fā)表者:北京博奧森生物      發(fā)表時間:2016-2-15
在我國,乙肝病毒感染及帶病毒者約占人群的十分之一,乙肝病毒可形成慢性感染,是肝癌和肝硬化的主要原因。乙肝病毒的外殼由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜及表面抗原覆蓋,它的里面含病毒的核殼體,由病毒的核心抗原及病毒DNA組成。核心抗原由兩個單體組成,每一個單體含183個氨基酸,前149個氨基酸與形成核心抗原的二聯(lián)體有關(guān),后34個氨基酸主要為堿性氨基酸,與病毒DNA直接結(jié)合。 乙肝病毒核心抗原(rHBcAg)主要存在于病毒顆粒內(nèi),在急性感染的早期即消失,抗核心抗原抗體產(chǎn)生于急性病毒感染,也見于帶病毒者,或康復(fù)期的病人。IgM抗核心抗體陽性表示急性感染,IgG抗核心抗體陽性表示曾有感染或慢性感染。 rHBcAg的應(yīng)用:rHBcAg由大腸桿菌表達(dá),含183個氨基酸,分子量為23kDa。 應(yīng)用:可用于臨床酶聯(lián)免疫檢測及蛋白質(zhì)電泳固相酶聯(lián)免疫檢測。 純化方法及純度:利用拄層析技術(shù),12% SDS-PAGE檢測純度大于95%。 保存方法和穩(wěn)定性:存放在負(fù)20度,有效期兩年。 核心抗原溶液:含2M尿素,pH 7.40的50mM 磷酸鹽。 乙型肝炎e抗原(rHBeAg)是由HBVDNAC基因區(qū)編碼的一種非顆粒性的分泌型核殼蛋白,臨床上將其作為判斷HBV活動性復(fù)制的指標(biāo)之一。HBeAg是重要的生物原材料,廣泛用于HBV感染者血清學(xué)檢測的相關(guān)診斷用品的制備,乙肝病毒的外殼由來自人體的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜及表面抗原覆蓋,它的里面含病毒的核殼體,它由病毒的核心抗原及病毒DNA組成。核心抗原基因可產(chǎn)生兩個不同的蛋白,一個是21.5-kDa的蛋白,含183個氨基酸可與病毒DNA結(jié)合,稱核心抗原;另一個為核心抗原的前體,該蛋白除了含與核心抗原相同的183個氨基酸外,在其起始處還有一段含29個氨基酸的多肽,核心抗原前體在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)修飾后,其N-端只保留了10個氨基酸,而C-端則去掉了34個與病毒DNA結(jié)合的堿性氨基酸,最后e抗原以這種形式被分泌出去。 核心抗原主要存在于病毒顆粒內(nèi),在急性感染的早期即消失,抗核心抗原抗體產(chǎn)生于急性病毒感染,也見于帶病毒者,或康復(fù)期的病人。IgM抗核心抗體陽性表示急性感染,IgG抗核心抗體陽性表示曾有感染或慢性感染。 如果血清e抗原陽性,表明該病毒有傳染他人的危險,檢測e抗原還可指導(dǎo)治療,e抗原的消失表明治療的有效性。如果病人的抗e抗原陽性,則表明病人急性感染階段的結(jié)束,病毒的傳染性大大地降低。 rHBeAg的表達(dá)及應(yīng)用:rHBeAg由大腸桿菌表達(dá),在起始密碼子前含有10個氨基酸,后面和含有149個氨基酸的多肽相連接,分子量為18 kDa。 該重組蛋白可用于臨床酶聯(lián)免疫檢測及蛋白質(zhì)電泳固相酶聯(lián)免疫檢測。 純化方法及純度:利用拄層析技術(shù),12% SDS-PAGE檢測純度大于95%。 保存方法和穩(wěn)定性:存放在負(fù)20度,有效期兩年。 核心抗原溶液:含2M尿素,pH 7.40的50mM 磷酸鹽。
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